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Technical articles賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀是一款高效能的基因檢測平臺,擁有強大的檢測通量和靈敏度,滿足不同領(lǐng)域的研究和檢測需求。其特點包括:
96孔板高通量設(shè)計:一次實驗?zāi)軌蛱幚?6個樣本,適合高通量篩選、臨床診斷及大規(guī)?;虮磉_檢測。
五通道熒光檢測系統(tǒng):配備五個獨立熒光檢測通道,允許用戶進行多重PCR反應(yīng),一次實驗中同時檢測多個靶標基因,大大提升實驗效率。
快速升降溫技術(shù):采用精確的熱循環(huán)系統(tǒng),溫控精度高,能夠顯著縮短PCR循環(huán)時間,確保實驗結(jié)果的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性。
實時數(shù)據(jù)監(jiān)控與分析:配套的軟件可以進行實時熒光信號監(jiān)控,提供即時數(shù)據(jù)分析和結(jié)果可視化,極大地方便了實驗進程中的決策。
高度靈活的實驗設(shè)置:支持靈活的程序編排,用戶可以根據(jù)實驗需求自由設(shè)置溫度、時間及循環(huán)參數(shù),適用于不同類型的PCR實驗。
CFX96在多個領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用,適應(yīng)不同的科研與臨床需求:
基因表達定量分析:可用于研究基因的相對或絕對表達水平,適用于功能基因研究及藥物研發(fā)中的靶點篩選。
病原體檢測:在臨床上廣泛用于病毒、細菌等病原微生物的快速檢測,包括新興傳染病的診斷及防控。
SNP基因分型:能夠精確檢測單核苷酸多態(tài)性,用于遺傳學(xué)研究和藥物基因組學(xué)中的個性化醫(yī)療方案開發(fā)。
基因突變分析:通過特異性引物和探針設(shè)計,可檢測基因突變點,尤其適合癌癥突變研究和遺傳病檢測。
食品與環(huán)境安全檢測:適用于轉(zhuǎn)基因食品檢測、環(huán)境樣本中的微生物監(jiān)控等領(lǐng)域。
樣本準備:從生物樣本中提取DNA或RNA,隨后進行反轉(zhuǎn)錄(如果是RNA樣品),以制備cDNA。準備好含有引物、探針及熒光染料的PCR反應(yīng)混合物。
樣本加載:將PCR反應(yīng)混合物分裝至96孔板中,密封光學(xué)封板以避免污染。
實驗設(shè)置:在CFX96的控制軟件中設(shè)置好PCR反應(yīng)條件,包括變性、退火、延伸等步驟的時間和溫度。選擇合適的熒光檢測通道。
實驗運行與監(jiān)控:啟動儀器,系統(tǒng)會實時監(jiān)控?zé)晒庑盘柕淖兓?,用戶可以隨時查看擴增曲線和Ct值。
結(jié)果分析與導(dǎo)出:實驗完成后,利用軟件自動生成標準曲線和Ct值報告,分析基因表達或病原體載量。
賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀的標準貨號為1855195。用戶在采購時需根據(jù)實驗需求選擇適合的配置,并確認具體貨號。
賽默飛CFX96的核心工作原理是基于實時熒光定量PCR(qPCR)。每個PCR反應(yīng)循環(huán)中,模板DNA經(jīng)歷變性、退火和延伸三個步驟,DNA的擴增伴隨著熒光染料的結(jié)合。熒光信號在每個循環(huán)中逐漸增強,儀器通過內(nèi)置的光電檢測器實時捕捉熒光信號,生成擴增曲線并確定Ct值(Cycle threshold)。Ct值越低,說明樣品中靶標基因的初始濃度越高。通過與標準曲線對比,能夠定量分析樣本中的DNA或RNA濃度。
引物與探針設(shè)計:確保引物和探針的設(shè)計特異性高、退火溫度匹配,避免非特異性擴增,提升實驗可靠性。
反應(yīng)體系優(yōu)化:針對不同實驗體系,優(yōu)化Mg2+、dNTPs、Taq酶等反應(yīng)物的濃度,確保最佳擴增效率。
標準曲線構(gòu)建:使用已知濃度的標準品建立標準曲線,確保實驗定量分析的準確性。
防止交叉污染:確保實驗操作在無菌條件下進行,特別是在樣本裝載和光學(xué)封板步驟,避免氣溶膠污染。
數(shù)據(jù)分析與結(jié)果驗證:實時監(jiān)測數(shù)據(jù)的變化,分析結(jié)果時注意樣本中的背景熒光干擾,必要時使用多次重復(fù)實驗確保數(shù)據(jù)可靠性。
檢測通量:一次最多可處理96個樣本,適合大規(guī)模實驗和高通量分析。
熒光檢測通道:五通道光學(xué)系統(tǒng),能夠同時監(jiān)測多種熒光信號,用于多重PCR實驗中的靶標基因檢測。
靈敏度:檢測靈敏度高,可檢測單拷貝水平的DNA或RNA樣本,適合低豐度基因檢測需求。
動態(tài)范圍:寬廣的線性動態(tài)范圍,通常在10^1至10^9拷貝之間,保證了基因表達的高精度定量。
溫控性能:CFX96的溫控系統(tǒng)精度為±0.2℃,并具有良好的孔間溫度均一性,確保所有樣本的反應(yīng)一致性。
擴增速度:通過快速循環(huán)技術(shù),可以在較短時間內(nèi)完成一次完整的PCR實驗,提升實驗室的工作效率。
賽默飛CFX96實時熒光定量PCR儀憑借其高精度、快速、靈活的實驗操作能力,成為生命科學(xué)研究、醫(yī)學(xué)檢測和基因組學(xué)研究中的工具。其多通道檢測、高靈敏度與數(shù)據(jù)自動化分析功能,為科研工作者提供了理想的實驗平臺,助力科研與臨床的快速發(fā)展。